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孕妇尿中绒毛膜促性腺激素的提取

2019-06-29 16:04:47 养殖种植技术书籍

孕妇尿中绒毛膜促性腺激素的提取

目的 了解绒毛膜促性腺激素的来源,学会从孕妇尿中提取绒毛膜促性腺激素(HCG)的操作技术。

实验前的思考 妇女怀孕后,胎盘绒毛膜滋养层细胞会分泌一种蛋白类激素,叫做绒毛膜促性腺激素(HCG)。这种激素会随尿排出,在怀孕3~4月内浓度最高,以后逐渐下降。收集初孕妇女的新鲜尿液可以提取出HCG,提取HCG的得率、质量、效价跟诸多因素有关。

材料器具 孕期4个月以内的孕妇尿;10升以上搪瓷桶或水缸、塑料桶,抽滤瓶,烧杯,量筒,研钵,布袋,抽气泵或水流抽气管,pH试纸;苯甲酸钠,工业盐酸或冰乙酸,95%乙醇,丙酮。

步骤

1.收集孕妇新鲜尿10000毫升,加入250克苯甲酸钠,搅拌,使苯甲酸钠溶化。

2.慢慢滴入盐酸,搅拌,调pH值至4~4.5,这时尿液颜色呈乳白色。

3.上述混合物用布袋过滤,并压干。

4.把布袋内沉淀物倒入塑料桶内,加入95%乙醇搅拌后静置,吸去上清液(可回收再利用)。取沉淀物放入抽滤器抽滤(见图)。

5.用丙酮洗涤沉淀反复抽滤。

6.把滤纸上沉淀取下铺开,在室温下自然干燥1小时后,放入研钵研细,即得到HCG粗品。称重,计算得率。

7.对提取得到的HCG进行生物检验[参考妊娠测定(青蛙排精法)]。

注意事项

1.孕妇尿必须新鲜,夏天尿易变质,难以提取。冬天效果较好。正常尿液应该呈微酸性,如pH值>7,则尿液无用,已失效。

2.怀孕超过5个月的孕妇尿液中,HCG含量过低,已没有提取价值。

分析和讨论

1.HCG为生物活性物质,因此除了尿液新鲜外,还应该保持低温和快速操作,以防变性。

2.孕妇尿以清晨尿HCG含量最高。

3.有机溶剂乙醇、丙酮抽提洗涤次数越多,得到的HCG纯度越高,但得率也会降低,操作中应该小心,防止损失。一般得率可以做到0.04~0.06%。

(陆建身)

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