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蚯蚓横切片的制作

2019-06-29 16:04:24 养殖种植技术书籍

蚯蚓横切片的制作

目的 了解切片标本制作的基本知识,学会几种制作方法。

实验前的思考 制作切片标本,步骤繁多,其中特别是脱水这一环节非常重要,如果脱水的时间过短或乙醇浓度不足,组织块中的水分不能完全脱掉,当组织块浸在透明液——二甲苯中,便不能透明,并使以后浸蜡时石蜡难以透入,切片不能成功。

材料器具 蚯蚓;剃刀(或双面刀片),玻璃缸,卫生纸,吸水纸;琼脂(洋菜),70~100%等级乙醇,蒸馏水,自来水,0.1~0.2%氨水,1%盐酸乙醇,二甲苯,苏木精染色液,伊红染色液,波因(Bouin)氏固定液(配制方法参见第722页)。

步骤

1.取一玻璃缸,缸底垫几层湿卫生纸,然后取较小的蚯蚓放入缸中,缸上加盖,以免蚯蚓爬出。在缸中放入一些琼脂胶冻作食料进行喂养,目的是使它把消化道内的泥沙排尽。排出的泥沙在湿草纸上,因此每天须换一次湿草纸。泥沙排尽后身体显现透明时,就可以固定。

2.把培养的蚯蚓浸入波因氏固定液中固定2~4小时,然后用剃刀或双面刀片切取它身体中部的一段,再切成0.5厘米长的若干小段,接着继续用波因氏固定液固定4~8小时。

3.用70%乙醇浸洗,除去因固定液而染上的黄色。

4.等级乙醇脱水→透明→透蜡→包埋→切片→贴片→烤干→溶蜡→加水(以上各步骤详见本书第767页石蜡切片法)。

5.把切片从蒸馏水中取出后,投入德氏(Delafield’s)苏木精中染色5~10分钟。苏木精是专染细胞核用的。取出后切片是深紫红色的,用自来水或弱碱性水浸10分钟左右使切片碱化(蓝化),切片颜色呈深蓝色。用1%盐酸乙醇分化数秒钟,再用自来水碱化切片1小时至数小时。这时,切片又恢复呈蓝色。

6.从染色液中取出后,需要先经过蒸馏水迅速浸洗2次,以洗去玻片上多余的红色(在蒸馏水中不能停留太久,否则会使组织上的红色完全褪掉)。然后依次浸入伊红乙醇液,第1瓶95%乙醇(2~5分钟)→第2瓶95%乙醇(2~5分钟)→第1瓶无水乙醇(2~5分钟)→第2瓶无水乙醇(2~5分钟)→1:6石碳酸二甲苯或1:1的无水乙醇二甲苯,脱水完毕。

7.经脱水的切片,浸入第1瓶二甲苯中(5~10分钟),再浸入第2瓶二甲苯(5~10分钟),使组织透明,置于载玻片上。

8.用吸水纸把组织四周多余的二甲苯擦去,滴一点树胶在组织上,加盖盖玻片。

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