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河蚌外套膜染色体制备

2019-06-29 16:03:46 养殖种植技术书籍

河蚌外套膜染色体制备

目的 学会软体动物染色体制备方法,观察河蚌染色体形态。

实验前的思考 河蚌是常见的软体动物之一,也是中学动物学的实验材料。在观察河蚌形态结构实验的基础上,还可以一物多用,进行河蚌染色体制备和观察的实验。

材料器具 河蚌;普通显微镜,解剖刀,剪刀,载玻片,研钵,注射器,针头,吸管,手摇或电动离心机,离心管;0.1%秋水仙素,45%乙酸,2%乙酸洋红,0.2%氯化钾溶液,甲醇,冰乙酸。

步骤

1.在河蚌的两侧外套膜边缘上,各注射0.1%的秋水仙素0.5毫升,6~8小时后,剪下两侧外套膜(见图),剪碎后放在研钵中轻轻研磨。

2.加入20~30毫升0.2%氯化钾溶液,混匀,低渗处理20~30分钟。移入离心管用手摇或电动离心机,以1000转/分的速度运转8分钟,弃去上清液。

3.新配制的甲醇-冰乙酸(3∶1)固定液,固定沉淀在离心管底15分钟,用吸管吹打几次,沉降片刻后,吸出上部液体,弃去下部粗的组织块。

4.吸取上部液体,滴在洁净的载玻片上,液体在空气中很快蒸发干燥。滴上2%乙酸洋红染色10分钟,用水轻轻冲去染液,干燥后镜检,可以看到有分散的染色体。

分析和讨论 染色体在制备技术上有一定要求,所用的材料必须是生长旺盛,分裂活跃的细胞。所以宜选取3~4龄的河蚌,不要形体过大和年龄过老的。低渗和固定是成败的关键,如果低渗不够,细胞核膜不易胀破,染色体就看不到。这时可以采用延长低渗时间,提高温度或摇动振荡等办法。固定一次如果看不到染色体,可2次或3次固定补救。滴片时,可从20厘米以上的高度滴下,依靠重力作用,使核膜胀破,染色体分散开来。

(陆建身)

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