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ATP跟肌肉收缩关系的验证

2019-06-29 16:02:17 养殖种植技术书籍

ATP跟肌肉收缩关系的验证

目的 了解ATP能促进肌肉收缩的作用。

实验前的思考 肌肉收缩需要消耗能量,如要使已除去神经和失掉大部分酶的离体肌肉,重新恢复收缩的功能,就必须添加足够的能源物质——ATP。

材料器具 蟾蜍;解剖器,蛙板,培养皿,试管,烧杯,玻璃钩,玻璃棒,大头针,铜锌弓(即伽氏电极),显微镜,特种铅笔,纱布,线团,目镜测微尺,尺;50%甘油,两栖动物生理盐水(0.65%氯化钠溶液),0.001M碳酸氢钠,0.1M氯化钾,3%氯化钾,0.01M氯化钙,0.5%ATP溶液。

步骤

1.实验前处理(须在实验前24小时进行,如在一周前更好)。

(1)取一只活蟾蜍,捣毁脊髓和脑(方法见本书第462页实验内容)。剪去上半身,剔除全部内脏。剥皮,剪去腹部肌肉,放入盛有生理盐水(0.65%氯化钠溶液)的烧杯中洗净。

(2)取出蟾蜍标本,放在蛙板上,用剪刀从尾干骨处,沿耻骨中线对半剪开,取下两条后肢,再放入生理盐水中浸洗。取出一条后肢,放在蛙板上,用大头针固定脊柱端和趾端,用玻璃钩细心分离出小腿后侧的腓肠肌,找到两端肌腱,用两根线分别结扎于肌腱处,仔细地从股骨处和脚跟处剪断(尽量留长些)。

(3)取一根玻璃棒,将腓肠肌两端结扎处缚在玻璃棒上,然后浸入盛有50%甘油的试管里,必须浸没。放入冰箱,在0~5℃温度下放24小时,如放一周更好(图示)。

2.取一支医用针剂ATP(每支2毫升,含ATP20毫克),只须以1∶1稀释成0.5%ATP备用。另配制1∶1的0.1M氯化钾和0.001M碳酸氢钠混合液,注20毫升混合液于培养皿中,从冰箱中取出腓肠肌,放入混合液中软化5~10分钟。在浸置软化的过程中,用两根玻璃钩轻轻地把整束腓肠肌分离成肌纤维束,再继续分离,越细越好,至少使直径在0.5毫米以下,最后小心地换上新鲜的混合液。

3.取3块洁净的载玻片,编号。显微镜上按好目镜测微尺。在1号载玻片上,放上两束肌纤维束,用玻璃钩分细,理直,加上盖玻片。在显微镜下选择一二根横纹较清楚的肌纤维,观察它们的长度,然后在盖玻片旁滴加一滴3%氯化钾溶液,稍候片刻,再观察它们的长度是否有变化?滴液时必须慢,以免材料浮动移位。

在2号载玻片上放两束肌纤维束,分细理直,不加盖玻片,先在显微镜下观察它的长度,然后提高镜筒,用铜锌弓(伽氏电极)刺激肌纤维,尽量不移动肌肉位置,立即放下镜筒,再观察它们的长度是否有变化。

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