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植物血球凝集素

2019-06-29 16:02:04 养殖种植技术书籍

植物血球凝集素(PHA)的制备

目的 学会从豆科植物种子提取植物血球凝集素的操作技术。

实验前的思考 植物血球凝集素(PHA)是一种糖蛋白,因为它具有使红血球凝集的作用,故名。PHA又有刺激细胞分裂的作用,所以广泛应用在人体外周血淋巴细胞离体培养,作为促细胞分裂剂。PHA可以从各种豆科植物种子中提取,也能从马铃薯(土豆)块茎中提取。PHA的效价可以由血球凝集试验或淋巴细胞转化率来测定。

材料器具 四季豆(即云豆、菜豆),刀豆或其他豆类;研钵,剪刀,离心机,离心管,纱布;0.85%氯化钠溶液。

步骤

1.称取8克颗粒饱满的豆子,用蒸馏水洗净,纱布吸干,晾干。

2.用剪刀把豆子剪碎,放在研钵中研细,越细越好。

3.把上述豆粉称取5克放入烧杯中,同时加入25毫升0.85%氯化钠溶液浸泡过夜,中间摇动几次。

4.上述浸液经纱布过滤,去除粗渣后,放在2支离心管里,使离心机以8500转/分运转20分钟,弃去沉淀,上清液就是PHA提取液,可分装小瓶,在4℃下至少可保存3个月。

分析和讨论

1.PHA质量的好坏可经红血球凝集试验测定,根据PHA经一定稀释后,仍使红血球凝集的强弱程度来检验。PHA更直接的检验法是直接用于外周血淋巴细胞离体培养(参考“人体外周血淋巴细胞染色体的制备”实验),计算淋巴细胞的转化率来确定。

2.PHA使红血球凝集的机理是由于它能跟红细胞膜表面的糖分子连接,在细胞之间形成特殊的“桥”的缘故。

建议 不同种类的豆提取的PHA效价有一定差异,经试验,广东鸡子豆、四川大白豆的效果较好。马铃薯的效价虽然较低,但它取材方便。

(陆建身)

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