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放线菌的培养和观察

2019-06-29 15:59:47 养殖种植技术书籍

放线菌的培养和观察

目的 认识“5406”放线菌的形态特征,学习无菌接种的技能和培养“5406”放线菌的方法。

实验前的思考 放线菌是介于细菌同真菌之间的单细胞微生物。在显微镜下它很像真菌,却又不是真菌。放线菌广泛分布于自然界,在土壤中更是多见。医药上应用的多种抗菌素,大部分是放线菌的发酵产品。有些放线菌能引起动植物病害。因此它们跟人类的关系十分密切。

材料器具 “5406”放线菌菌种;显微镜,载玻片,盖玻片,镊子,滴管,滤纸,细线,接种针,接种箱,恒温箱,高压灭菌锅,烧杯,三角烧瓶,酒精灯,三脚架,石棉网,火柴,油纸,纱布,棉絮,碟子,解剖刀,量杯,天平,角匙,肥皂,试管,培养皿;马铃薯,蔗糖,甲醛溶液(福尔马林液),高锰酸钾,石碳酸复红溶液,甘油,70~75%乙醇。

步骤

1.制备培养基

(1)制作培养基的方法 把马铃薯的块茎洗净,削皮,挖眼芽,切成小块。称取200克,放在1000毫升水里,煮沸半小时。用纱布过滤,在滤液里补足水分到1000毫升,再加2克葡萄糖(或蔗糖)和20克琼脂,继续加热,直到琼脂完全溶解为止。冷藏备用。

(2)装管 加热培养基,趁热注入试管,约占试管容积的1/5,用洁净纱布擦干净试管口,塞上棉絮塞,使棉絮塞贴紧试管壁。

(3)消毒 装有培养基的试管,每六支扎成一捆用油纸包裹试管有棉絮塞的一端,捆好,放在高压灭菌锅里灭菌。先在高压灭菌锅里加入1500毫升的水,然后把捆好的试管放进锅里,加盖密闭,逐渐加热。使锅内压力逐渐上升到1.2~1.5×105帕斯卡,维持40分钟,熄火,使锅内压力徐徐下降到同大气压强相等为止。

(4)制成试管斜面培养基 灭菌以后取出试管,趁热斜放,斜面为试管总长度的1/2。冷却以后,试管里的培养基凝固成半透明的斜面培养基。

2.接种

(1)把接种箱揩拭干净,用紫外线灯灭菌数小时,杀死箱内杂菌。一些接种用品如接种针和酒精灯等都要预先放入消毒。接种箱可以用旧木料自制,如图示。

(2)接种前,用肥皂洗净双手,擦干,再用75%乙醇消毒。菌种由窗门放入,再将两手从袖套伸进接种箱,点燃酒精灯。用左手并排拿起有菌种的试管和培养试管,试管口靠近酒精灯火焰,旋松棉絮塞,右手的拇指和食指拿起接种针,放在火焰上烧红,进行灭菌。

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